Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分,含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖,鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上,能在DMEM培養基中重建形成膜結構,這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8μm,而且膜孔都被Matrigel覆蓋,細胞不能自由穿過,必須分泌水解酶,并通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜,這與體內情況較為相似。可通過這種模型來檢測細胞的侵襲情況。
通過體外模型來檢測細胞的侵襲情況,主要應用于各種細胞因子對惡性腫瘤細胞侵襲和轉移的影響及一些抑制血管生成的新藥研究。
實驗步驟:
1. matrigel在4℃過夜融化
2. 稀釋matrigel至終濃度1mg/ml
3. 在chamber上室底部中央垂直加入稀釋后的matrigel。37℃溫育4-5 h
4. 所有細胞培養試劑和Transwell chamber放在37℃恒溫水浴箱溫育
5. 消化培養至對數期的細胞,用無血清培養基懸浮細胞,計數,調整濃度為5*105/ml
6. 在下室加入含20%血清的培養基。上室加入細胞懸液,37 ℃、5%CO2、飽和濕度條件下繼續培養24 h
7. 取出chamber,吸干上室液體,移到預先加入甲醇的孔中,室溫固定30min
8. 取出chamber,吸干上室固定液,移到預先加入結晶紫染液的孔中,室溫染色15-30min;用PBS沖洗浸泡數次,取chamber,先用干棉簽將上室內液體吸去,再用棉簽輕輕擦Matrigel凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞
9. 揭下膜表面上的細胞,晾干,封片
10. 顯微鏡下計數,統計結果;(若不用保存底膜,可省去步驟9)
結果示意圖:
服務周期:
服務內容 |
說明 |
價格/元 |
實驗周期 |
細胞侵襲 |
建議3重復 |
100元/孔 |
3個工作日 |
溫馨提醒:
1. 提供105細胞
2. 一塊板共有24個小室,不足一塊板按照一塊板收費