? ??樣本采集前必須制定完整的計(jì)劃，其中應(yīng)包含采樣方法、采樣量、保存方法等，并充分考慮待測成分的穩(wěn)定性。對(duì)于當(dāng)天檢測的樣本，應(yīng)使用無菌器材采集，并立即置于4℃保存，并在8小時(shí)內(nèi)完成檢測。對(duì)于需要第二天再次檢測的樣本，應(yīng)使用無菌器材采集后立即分裝成一次檢測的用量，并置于-20℃凍存?zhèn)溆茫员苊夥磸?fù)凍融。如有長期保存需求，建議-70℃或-80℃凍存。對(duì)于特殊樣本，例如血液或組織樣本，需要根據(jù)具體待測成分采取相應(yīng)的特殊處理措施，例如添加抗凝劑或蛋白酶抑制劑等。所有樣本均應(yīng)避免反復(fù)凍融。

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????可用于ELISA實(shí)驗(yàn)的樣本種類很多，包括：血清、血漿、細(xì)胞上清、細(xì)胞裂解液、尿液、滑液、腦脊液、肺泡灌洗液、以及各種組織的組織勻漿。這里主要介紹血清、血漿、細(xì)胞上清、尿液、細(xì)胞裂解液、以及各種組織的組織勻漿的樣本制備。

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????血清

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????將采集的全血置于室溫（18-25℃）下靜置30-60分鐘，或直至觀察到血塊完全形成。然后將血液樣本在4℃下以1000-2000g的相對(duì)離心力離心10分鐘。小心地使用移液器吸取上清液（血清），避免觸碰血塊或產(chǎn)生氣泡，并將血清轉(zhuǎn)移至干凈的試管中。若保存過程中有沉淀形成，則再次以相同的條件離心。根據(jù)檢測需求，將血清短期保存在4℃或長期保存在-20℃或-80℃（推薦）凍存。

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????等離子體

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????根據(jù)檢測指標(biāo)選擇合適的抗凝劑（EDTA、檸檬酸鈉或肝素），輕輕顛倒混勻血液數(shù)次。然后，將血液樣本在室溫或4℃（推薦用于不穩(wěn)定指標(biāo)）下，以1500-2000g的相對(duì)離心力離心10-15分鐘。小心地使用移液器吸取上清液（血漿），避免觸碰下層細(xì)胞，并將血漿轉(zhuǎn)移至干凈的試管中。若保存過程中有沉淀形成，則再次以相同條件離心。根據(jù)待測指標(biāo)的穩(wěn)定性，將血漿短期保存在4℃或長期保存在-20℃或-80℃（更推薦）凍存。并記錄保存時(shí)間，避免樣本過期失效。

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????尿

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????收集指定時(shí)間段的尿液（例如晨尿、隨機(jī)尿或24小時(shí)尿）于無菌試管中。將尿液樣本在室溫或4℃下以1500-2000g的相對(duì)離心力離心10-15分鐘，以去除細(xì)胞和雜質(zhì)。小心地使用移液器吸取上清液，轉(zhuǎn)移至干凈的試管中。若保存過程中有沉淀形成，則再次以相同條件離心。根據(jù)檢測需求，將尿液短期保存在4℃或長期保存在-20℃或-80℃凍存。

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????細(xì)胞培養(yǎng)上清液

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????收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液到無菌離心管中。在4℃下以1000-2000g的相對(duì)離心力離心10分鐘，以去除細(xì)胞和較大碎片。使用移液器小心地吸取上清液，避免擾動(dòng)沉淀，轉(zhuǎn)移至新的無菌離心管中。對(duì)于某些對(duì)細(xì)胞碎片敏感的實(shí)驗(yàn)，建議在此基礎(chǔ)上再進(jìn)行一次10000g、4℃離心10分鐘。根據(jù)待測分泌成分的特性，考慮添加蛋白酶抑制劑或其他保護(hù)劑。將處理后的上清液短期保存在4℃或根據(jù)需要分裝后長期保存在-20℃或-80℃凍存，并注意避免反復(fù)凍融。在進(jìn)行后續(xù)檢測時(shí)，應(yīng)考慮細(xì)胞培養(yǎng)基本身的成分對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的潛在影響，并設(shè)置適當(dāng)?shù)膶?duì)照組。

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????細(xì)胞裂解物

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????將細(xì)胞懸液用不含鈣鎂離子的PBS(pH7.2-7.4)稀釋至合適的細(xì)胞濃度（例如1x10^7/ml）。在冰上加入適量的組織蛋白提取試劑，輕輕混勻，裂解30分鐘。然后在4℃下以12000g的相對(duì)離心力離心15分鐘，以去除細(xì)胞碎片和未裂解的細(xì)胞。使用移液器小心地吸取上清液，避免擾動(dòng)沉淀，轉(zhuǎn)移至新的離心管中。對(duì)于蛋白檢測實(shí)驗(yàn)，裂解液中需添加蛋白酶抑制劑。若保存過程中有沉淀形成，則再次以相同條件離心。根據(jù)待測胞內(nèi)成分的特性，選擇合適的保存溫度和方法，例如短期保存在4℃，長期保存在-20℃或-80℃。

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????組織樣本

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????將新鮮組織標(biāo)本切成小塊(約1-2mm3)，每克組織塊加入5-10倍體積的預(yù)冷PBS(pH7.4)或其他合適的裂解液（例如RIPAbuffer，并添加蛋白酶抑制劑）。將組織塊和裂解液置于凍存管中，浸入異戊烷中，然后緩慢放入液氮中進(jìn)行冷凍保存。解凍時(shí)，將凍存管置于37℃水浴中快速搖晃解凍，然后立即置于冰上。使用合適的方法進(jìn)行勻漿，例如手工研磨、勻漿器或高速勻漿機(jī)。先低速離心（例如1000g，5分鐘，4℃）去除未勻漿的組織塊和細(xì)胞碎片，然后高速離心（例如12000g，15分鐘，4℃）收集上清液。將上清液分裝，一部分用于立即檢測，其余部分凍存于-80℃?zhèn)溆茫苊夥磸?fù)凍融。