羊口蹄疫 A 型抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
使用說明書
【產品名稱】
通用名：羊口蹄疫 A 型抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A（ELISA）
【包裝規格】 96T×1/盒(注：酶標板不可拆)、96T×2/盒（注：酶標板一塊可拆、一塊不可拆）
【預期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發生水泡和爛斑。
本試劑用于檢測羊血清中口蹄疫 A 型抗體，可用于口蹄疫 A 型疫苗免疫效果評價。
【原 理】
本試劑盒系由預包被口蹄疫A型抗體的酶標板、抗體工作液、抗原液酶標記物及其他配套試劑組成，應用阻斷酶聯免疫法（ELISA）原理檢測羊血清樣本中口蹄疫A型抗體。實驗時將稀釋的樣本與抗原液同時加入酶標板中孵育，樣本中的抗體與酶標板上的抗體競爭抗原，阻斷抗原與板的結合；經洗滌后，再加抗體工作液孵育；經洗滌后加入酶標記物孵育；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有口蹄疫A型抗體。
【試劑盒組成】
【儲存及有效期】 于 2～8℃避光保存，有效期為 12 個月。
包被板開封后請于 2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為 2 個月。
【適用儀器】 含 450nm、630nm 波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品 1 周內可于 2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作 20 倍稀釋。
3.用已稀釋的洗滌液將待檢血清按 64 倍稀釋（如 5μl 血清加入 315μl 洗滌液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫 30 分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設空白對照 1 孔、陰性/陽性對照各 2 孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照 50μl，樣品孔每孔加入稀釋后的樣品 50μl；每孔再加入抗原液 50μl（空白孔除外）。
注：加入抗原后樣本稀釋比例相當于 1:128。
4.震蕩混勻 10 秒，置 37℃反應 30 分鐘。
5.扣去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復洗滌 5 次，拍干。
6.每孔加抗體工作液 50μl（空白孔除外），置 37℃反應 30 分鐘。
7.洗滌，同步驟 5。
8.每孔加酶標記物 50μl（空白孔除外），置 37℃反應 30 分鐘。
9.洗滌，同步驟 5。
10.每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl，混勻，37℃避光反應 15 分鐘。
11.每孔加終止液 50μl，混勻，用空白孔調零，于 450nm(可用 630nm 作參比波長）測定各孔吸光值（A 值）。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照 A 值≥1.0，陽性對照 A 值≤50%×陰性對照 A 值。
【檢驗結果的解釋】
1.PI（阻斷率）=（1-樣本 A 值/陰性對照孔平均 A 值）×100%，PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性。
2.本實驗檢測結果為陽性時表明待檢樣本中含有口蹄疫 A 型抗體，且效價高于 1:128，達到保護水平。
3.本實驗檢測結果為陰性時表明待檢樣本中不含有口蹄疫 A 型抗體，或效價低于 1:128，未達到充足保護水平。
4.如需了解樣本抗體的最終效價，可將樣本進行梯度稀釋，使 PI≥50%的最高稀釋比例即為該樣本抗體的最終效價。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性羊血清中口蹄疫 A 型抗體，根據 PI 值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
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