總一氧化氮合成酶(NOS)分型測試盒
一、測定原理:
NOS 催化 L-Arg 和分子氧反應(yīng)生成 NO,NO 與親核性物質(zhì)生成有色化合物,在 530nm 波長下測定吸光度,根據(jù)吸光度的大小可計算出 NOS 活力。
NOS 主要有兩種類型:即結(jié)構(gòu)型(cNOS)和誘導(dǎo)型(iNOS)。結(jié)構(gòu)型(cNOS)主要存在于神經(jīng)元和內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi),依賴鈣;誘導(dǎo)型(iNOS)主要存在于巨噬細(xì)胞內(nèi),不依賴鈣。根據(jù)此原理可以分型。
二、試劑組成與配制:
試劑一:底物緩沖液 6ml?2 瓶,-20oC 以下避光冷凍保存 3 個月。臨用前化凍搖勻。沒有用完的試劑,可以-20oC 以下避光冷凍保存以備下次再用。
試劑二:促進(jìn)劑淡黃色或白色粉劑?3 支,稀釋液 0.6 ml?3 支。-20oC 以下冷凍保存 6 個月。測試前取稀釋液一支 0.6ml 加入一支粉劑中充分混勻(即將 1.5ml 小離心管反復(fù)顛倒,并將小離心管尖部的液體彈下來),測試后剩余試劑可放入-20oC 以下冷凍保存,時間不超過一周。若發(fā)現(xiàn)粉劑變成黃褐色或咖啡色,則不可以再用。
試劑三:顯色劑(黃色)6ml?1 瓶,4oC 避光冷藏保存 3 個月。
試劑四:透明劑 6ml?1 瓶,室溫保存 6 個月。天冷后會凝固,37℃水浴變澄清時再使用。試劑五:終止劑 60ml?2 瓶,4oC 保存 6 個月。室溫低會出現(xiàn)渾濁,37℃水浴至透明再用。試劑六:液體 10ml×1 瓶,4℃保存 6 個月。用前請仔細(xì)觀察,如有結(jié)晶附著在瓶壁或瓶底,可將試劑連同瓶子一起在 90~100℃熱水中搖晃等其完全溶解后,即可使用。