6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)試劑盒(WST-8法)分光法/48樣
產(chǎn)品簡介:
6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH；EC 1.1.1.49）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是磷酸戊糖途徑的關(guān)鍵酶，同時(shí)維持 NADPH 在細(xì)胞內(nèi)的水平，NADPH 反過來維持細(xì)胞中谷胱甘肽水平進(jìn)而保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。因此 G6PDH 活性的高低可以從一定程度上反映生物體的生物合成和抗氧化能力。G6PDH 催化 6-磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯，同時(shí)將 NADP+還原為 NADPH，傳統(tǒng)方法是檢測 NADPH 在 340nm 處的吸光值。由于 NADPH 的摩爾消光系數(shù)（ε）較低，所以這種方法靈敏度低，且嚴(yán)重受到干擾。本試劑盒提供一種簡單，靈敏，快速的測定方法：該酶促過程產(chǎn)生的 NADPH 與特異顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生在 450nm 處有大吸收峰的有色物質(zhì)，通過檢測 450nm 處的增加速率，進(jìn)而計(jì)算出 G6PDH 酶活性大小。?
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰。
6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6-PGDH）活性測定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！
標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程：
1. 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（1nmol/μL）：向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸餾水（母液需在兩
天內(nèi)用且-20℃保存）。
2. 把母液稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol/μL。
3. 依據(jù) 40μL 標(biāo)準(zhǔn)品+720μL 試劑一+40μL 試劑三，混勻后室溫 5min 后于 450nm 處讀值，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
