分光光度法:50管/48樣
注? ?意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
TH位于線粒體的內膜上,又稱為線粒體復合體六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉化,調節線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應稱為TH-2,催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。
測定原理:
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉氫反應不能導致340nm吸光度發生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+還原生成APADH,APADH在375nm有特征光吸收,測定375nm光吸收的增加速率,來計算TH-2活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。